Witaminy w ściśle określonych dawkach. Wykorzystują aminokwasy jako źródła azotu. Zaletą tych pożywek jest to, że mają stały skład, dzięki czemu można na ich podstawie określić zapotrzebowanie drobnoustrojów na określone składniki odżywcze.
Pożywki stałe przygotowywane są z pożywek płynnych z dodatkiem środka uszczelniającego. Jako uszczelniacz zwykle stosuje się agar-agar. Agar-agar to produkt otrzymywany z wodorostów, ma postać żółtawego proszku lub płytek, zawiera wielkocząsteczkowe polisacharydy, nie ulega rozkładowi przez większość mikroorganizmów, nie ulega zniszczeniu w autoklawie, nie zmienia wartości odżywczej podłoża i nie powoduje nie hamują rozwoju drobnoustrojów. Do zastosowań immunologicznych i bakteriologicznych stosuje się zamrożony, klarowany agar, który po ugotowaniu lub autoklawowaniu mieszaniny proszku i wody topi się w temperaturze 85-100°C, a po ochłodzeniu do 45-48°C tworzy żel.
Aby przygotować gęstą pożywkę, dodaje się agar-agar w stężeniu od 1,5 do 3%.
Proste środowiska.
Bulion mięsno-peptonowy (MPB) jest białkową podstawą wszystkich pożywek.
Istnieje kilka sposobów przygotowania MPB:
a) w wodzie mięsnej z dodatkiem gotowego peptonu – jest to tzw. bulion mięsno-peptonowy;
b) na trawieniu produktów hydrolizy surowców za pomocą enzymów (trypsyna – bulion Hottingera, pepsyna – bulion Martina).
Są wygodne w transporcie, można je długo przechowywać, odciążają laboratoria od ogromnego procesu przygotowania mediów i przybliżają je do rozwiązania problemu standaryzacji mediów. Przemysł medyczny produkuje suche podłoża Endo, Levin, Ploskirev, agar z siarczynem bizmutu, agar odżywczy, węglowodany ze wskaźnikiem BP i inne.
Termostaty
Termostaty służą do hodowli mikroorganizmów.
Termostat to urządzenie utrzymujące stałą temperaturę. Urządzenie składa się z grzejnika, komory, podwójnych ścian, pomiędzy którymi krąży powietrze lub woda. Temperatura jest regulowana za pomocą termostatu. Optymalna temperatura do rozmnażania się większości mikroorganizmów wynosi 37°C.
Sposób przygotowania agaru płytkowego
MPA topi się w łaźni wodnej, a następnie schładza do temperatury 50-55°C. Szyjkę butelki spala się w płomieniu lampy alkoholowej, szalki Petriego otwiera się tak, aby szyjka butelki wpasowała się w nie dotykając krawędzi naczynia, wlewa się 10-15 ml MPA, zamyka pokrywkę zamknięte, naczynie wstrząsa się w celu równomiernego rozprowadzenia podłoża i pozostawia na poziomej powierzchni do czasu stwardnienia. Po wysuszeniu płytki agarowe przechowuje się na zimno.
Siew pętlowy
Używając sterylnej, schłodzonej ezy, nabierz kroplę materiału, lewą ręką otwórz jeden brzeg kubka, włóż pętlę do środka i wykonaj kilka pociągnięć w jednym miejscu pętelką po przeciwnej krawędzi, następnie oderwij pętlę i zaszczepij materiał równoległymi pociągnięciami od jednej krawędzi miseczki do drugiej w odstępie 5-6 mm. Na początku siewu, gdy w pętli znajduje się dużo drobnoustrojów, będą one rosły zlewająco, lecz z każdym pociągnięciem drobnoustrojów w pętli będzie coraz mniej i pozostaną one samotne i będą tworzyć izolowane kolonie.
Siew metodą Drigalskiego
Metodę tę stosuje się przy zaszczepianiu materiału silnie zanieczyszczonego mikroflorą (ropą, kałem, plwociną). Aby siać metodą Drigalskiego, weź szpatułkę i kilka filiżanek (3-4). Szpachelka- jest to instrument wykonany z drutu metalowego lub strzałki szklanej, wygięty w kształcie trójkąta lub litery L. Materiał wprowadza się do pierwszego kubka za pomocą pętly lub pipety i równomiernie rozprowadza za pomocą szpatułki po powierzchni podłoża; tą samą szpatułką, bez jej przypalania, wciera się materiał w pożywkę w drugim kubku, a następnie w trzecim. Dzięki takiemu wysiewowi w pierwszej doniczce wzrost będzie zlewny, a w kolejnych doniczkach wyrosną pojedyncze kolonie.
Izolacja czystej kultury według Szczukiewicza
Do siewu należy pobrać świeżo przygotowaną pożywkę z kondensatem. Materiał do badań pobierany jest za pomocą pętelki i ostrożnie, z zachowaniem zasad aseptyki, bez dotykania podłoża i ścianek, wprowadzany do skroplonej wody. Bakterie o dużej mobilności „pełzają” po mokrej powierzchni skośnego agaru.
W wyniku samodzielnej pracy student powinien wiedzieć:
1. Klasyfikacja, morfologia grzybów, metody ich badania.
2. Klasyfikacja i morfologia promieniowców.
3. Zasady reżimu przeciwepidemicznego i środki bezpieczeństwa.
Być w stanie:
1. Różnicować mikroorganizmy za pomocą mikroskopu.
2. Obejrzyj pod mikroskopem wybarwione preparaty.
3. Zdezynfekuj materiał, potraktuj dłonie środkami dezynfekcyjnymi.
4. Przygotować preparaty z czystych kultur.
Badania nad bakteriami wymagają skrupulatnej pracy z wykorzystaniem licznych urządzeń i instrumentów. Aby mikroorganizmy mogły jak najszybciej namnażać się w warunkach laboratoryjnych i móc zachować normalne funkcje życiowe, stosuje się specjalne pożywki. Ich skład i warunki biofizyczne są odpowiednie do aktywnego wzrostu kultury bakteryjnej.
Media odżywcze. Mikrobiologia i inne zastosowania
Kolonie bakterii hoduje się w warunkach laboratoryjnych na szalkach Petriego wypełnionych galaretowatą lub półpłynną zawartością. Są to pożywki, których skład i właściwości są jak najbardziej zbliżone do naturalnych, aby zapewnić wysokiej jakości wzrost roślin.
Na przykład takie selektywne środowisko nadaje się tylko do reprodukcji Escherichia coli. Następnie, po wysianiu wielu bakterii na szalkę Petriego, zobaczymy tylko kolonie tej samej E. coli i nic więcej. Przed przystąpieniem do pracy konieczna jest dobra znajomość metabolizmu badanej bakterii, aby móc ją skutecznie wyselekcjonować z mieszaniny innych gatunków.
Pożywki stałe, półpłynne i płynne
Bakterie można hodować nie tylko na podłożach stałych. Pożywki różnią się stopniem skupienia, który zależy od składu podczas wytwarzania. Początkowo wszystkie mają płynną konsystencję, ale po dodaniu żelatyny lub agaru w określonym procencie mieszanina krzepnie.
Płynne pożywki hodowlane zwykle znajdują się w probówkach. Jeżeli w takich warunkach zajdzie konieczność hodowli bakterii, należy dodać roztwór z próbką kultury i odczekać 2-3 dni. Wynik może być inny: tworzy się osad, pojawia się film, pływają małe płatki lub powstaje mętny roztwór.
Pożywka stała jest często wykorzystywana w badaniach mikrobiologicznych do badania właściwości kolonii bakteryjnych. Podłoża takie są zawsze przezroczyste lub półprzezroczyste, dzięki czemu możliwe jest prawidłowe określenie koloru i kształtu hodowli mikroorganizmów.
Przygotowanie pożywek hodowlanych
Podłoża takie jak mieszanki mięsno-peptonowe na bazie bulionu, żelatyny czy agaru można bardzo łatwo przygotować. Jeśli chcesz przygotować podłoże stałe lub półpłynne, dodaj do płynu odpowiednio 2-3% lub 0,2-0,3% żelatyny lub agaru. Odgrywają główną rolę w twardnieniu mieszanki, ale nie są źródłem składników odżywczych. W ten sposób uzyskuje się pożywki odpowiednie do wzrostu kultur bakteryjnych.
1. PS do uprawy i badania właściwości biochemicznych.
1.1. media endo,Levina, Ploskirewa. Stosowane jako planowe podłoże do diagnostyki różnicowej do hodowli bakterii jelitowych (zawiera laktozę). Znajdujące się w tych podłożach mikroorganizmy fermentujące cukier mleczny (laktozę) tworzą kolorowe kolonie - laktozododatnie (czerwone kolonie z metalicznym połyskiem lub bez). Kolonie drobnoustrojów niefermentujących laktozy, bezbarwne - l akto-negatyw - delikatny róż, przezroczysty, przepuszczający światło.
Do 100 ml MPA (pH 7,6) w temperaturze 70°C dodać sterylnie 5 ml 20% roztworu laktozy i mieszaninę 0,5 ml nasyconego roztworu zasadowej fuksyny z 1,25 ml świeżo przygotowanego roztworu siarczanu sodu .
1.2.Pożywka ze skrobią określić mikroorganizmy tworzące amylazę. Dowiadują się o tym dodając do kultury kilka kropli płynu Lugola – kolor podłoża nie ulega zmianie. Niestrawiona skrobia daje w tym roztworze niebieską barwę.
1.3.Mleko. Wraz z rozwojem mikroorganizmów fermentujących laktozę ulega ona koagulacji.
2. Zestawy komercyjne – do badania właściwości biochemicznych (wyznaczanie zestawu enzymów mikroorganizmu w celu ich identyfikacji).
2.1. Mikrotesty- systemy (MTS). Są to płytki polistyrenowe z dołkami zawierającymi sterylne pożywki do diagnostyki różnicowej.
2.2.Systemy wskaźników papierowych (SIB) - diagnostyka różnicowa na bibule filtracyjnej.
3. Do hodowli i różnicowania mikroorganizmów beztlenowych: Pożywka Wilsona-Blaira. Przygotowany z agaru mięsno-peptonowego, do którego dodaje się glukozę, Na2SO3 i chlorek żelaza FeCl2. Na tym podłożu czynnik wywołujący zgorzel gazową powoduje czernienie i pękanie agaru. Wzrost zachodzi głęboko w agarze. W tym przypadku Na2SO3 redukuje się do Na2S (siarczyn sodu), który łączy się z chlorkiem żelaza, tworząc czarny siarczan żelazawy. Pęknięcie pożywki wiąże się z tworzeniem się gazu.
4. PS do badania właściwości sacharylitycznych:
Pożywki syczące z węglowodanami (glukozą, laktozą, sacharozą, arabinozą i innymi)w którym wykrywana jest aktywność enzymatyczna mikroorganizmów. Pod wpływem kwasu powstającego podczas rozkładu węglowodanów wskaźnik zmienia barwę podłoża. Podłoże słomkowożółte po pozytywnej reakcji zmienia kolor na czerwony lub intensywnie różowy, dlatego też podłoża te nazywane są „serią barwną”. Mikroorganizmy niefermentujące tego węglowodanu rosną na podłożu nie zmieniając jego barwy. O obecności gazu decyduje tworzenie się pęcherzyków w pożywce z agarem lub jego gromadzenie się w „pływaku” na pożywce ciekłej.
Pepton – 10 g, chlorek sodu – 5 g, węglowodany – 10 g, odczynnik Andrede’a (fuksyna) – 10 ml, woda destylowana do 1000 ml, pH po sterylizacji 7,2-7,4.
5. PS do badania właściwości proteolitycznych:
Media z żelatyną. U niektórych bakterii (Vibrio cholera, Staphylococcus, Bacillus wąglika itp.) enzymy proteolityczne wykrywa się poprzez upłynnienie żelatyny.
Środy z mlekiem. Mikroorganizmy, które ulegają rozkładowi kazeina (białko mleka), powodują peptonizację mleka – przybiera wygląd serwatki.
Media z peptonem. Podczas rozkładu peptonów może uwolnić się indol, siarkowodór i amoniak. Ich formacje określa się za pomocą papierków wskaźnikowych. Bibułę filtracyjną wstępnie impregnuje się określonymi roztworami, suszy, kroi w paski i po wysianiu kultury na MPB umieszcza pod korkiem pomiędzy nią a ścianką probówki. Po inkubacji w termostacie wynik jest brany pod uwagę. Amoniak powoduje, że papierek lakmusowy zmienia kolor na niebieski; gdy siarkowodór uwolni się na kartkę papieru namoczoną w roztworze zawierającym octan ołowiu i wodorowęglan sodu, powstaje siarczan ołowiu - papier staje się czarny; indol powoduje zaczerwienienie kartki papieru namoczonej w gorącym nasyconym roztworze kwasu szczawiowego.
Praca nr 2. Charakter rozwoju bakterii na pożywkach
(właściwości kulturowe)
Cel: badanie charakteru wzrostu bakterii na pożywce stałej - MPA.
Niezależna praca: opisz właściwości kulturowe rodzin wyhodowanych na MPA, wyniki wpisz do tabeli
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Koniec pracy -
Ten temat należy do działu:
Kompleks edukacyjno-metodologiczny „Mikrobiologia, Wirusologia”
Państwowa Budżetowa Instytucja Edukacyjna Wyższego Szkolnictwa Zawodowego Tyumgma Ministerstwa Zdrowia Rosji.. Departament Mikrobiologii.. kompleks edukacyjny i metodologiczny..
Jeśli potrzebujesz dodatkowych materiałów na ten temat lub nie znalazłeś tego czego szukałeś, polecamy skorzystać z wyszukiwarki w naszej bazie dzieł:
Co zrobimy z otrzymanym materiałem:
Jeśli ten materiał był dla Ciebie przydatny, możesz zapisać go na swojej stronie w sieciach społecznościowych:
| Ćwierkać |
Wszystkie tematy w tym dziale:
Metody tworzenia warunków beztlenowych
1) Metody fizyczne. Metody opierają się na hodowli mikroorganizmów w środowisku pozbawionym powietrza. Wysiew w pożywkach zawierających substancje redukujące i łatwo utleniające się: Jako wyd.
Do pracy nr 3
Hodowla wirusów Do hodowli wirusów wykorzystuje się: 1) Zarodki kurze. Zarodek kurze jest wygodnym modelem do hodowli wirusów
Samodzielna praca poza godzinami zajęć lekcyjnych
Co pokazano na zdjęciu? Cel korzystania z urządzenia? Który
Podłoża do diagnostyki różnicowej to specjalne mieszaniny składników odżywczych służące do określania gatunku drobnoustrojów i badania ich właściwości. Kiedy bakterie rosną na podłożach diagnostyki różnicowej, zachodzą procesy chemiczne w wyniku obecności różnych bakterii w komórce drobnoustroju. Niektóre z nich są zdolne do rozkładu, inne - jeszcze inne - powodują reakcje utleniania, redukcji itp. Dzięki działaniu enzymów w środowisku diagnostyki różnicowej zachodzą odpowiednie zmiany.
Różnicowe środowiska diagnostyczne można podzielić na cztery główne grupy.
Ryż. 1-6. Różne formy rozkładu żelatyny. Ryż. 7 - 9. Pożywka płynna z węglowodanami i wskaźnikiem Andrade: ryc. 7 - brak fermentacji; Ryż. 8 - fermentacja z utworzeniem kwasu; Ryż. 9 - fermentacja z utworzeniem kwasu i gazu. Ryż. 10 - 12. Pożywka półpłynna z węglowodanami i wskaźnikiem BP (z suchej pożywki): ryc. 10 - brak fermentacji; Ryż. 11 - fermentacja z utworzeniem kwasu; Ryż. 12 - fermentacja z utworzeniem kwasu i gazu. Ryż. 13-15. Sztuczne serum lakmusowe Seitza: ryc. 13 - brak fermentacji; Ryż. 14 - fermentacja z utworzeniem kwasu; Ryż. 15 - fermentacja z tworzeniem. Ryż. 16 i 17. Mleko z błękitem metylenowym: ryc. 16 - brak redukcji; Ryż. 17 - redukcja. Ryż. 18 i 19. Pożywka Simonsa: ryc. 18 - brak asymilacji cytrynianów; Ryż. 19 - asymilacja cytrynianu. Ryż. 20 - 24. Mleko lakmusowe: ryż. 20 - brak fermentacji; Ryż. 21 - fermentacja z utworzeniem kwasu; Ryż. 22 - fermentacja z utworzeniem zasady; Ryż. 23 - peptonizacja; Ryż. 24 - redukcja. Ryż. 25. Upłynnianie zwiniętego produktu (w świetle przechodzącym). Ryż. 26. Hemoliza na agarze z krwią (w świetle przechodzącym). Ryż. 27. Pożywka krwi z tellurynem potasu.
1. Pożywki zawierające białko i wykazujące zdolność drobnoustrojów do rozkładania białek (właściwości proteolityczne): „kolumna mięsno-peptonowa”, skoagulowana surowica końska lub bydlęca, mleko, agar z krwią. Podczas inokulacji bakterii poprzez nakłucie żelatyny mięsno-peptonowej, w „kolumnie”, w przypadku rozpadu białka obserwuje się upłynnienie podłoża. W przypadku inokulacji na pożywce ze skoagulowaną serwatką, rozkład białek jest określany poprzez upłynnienie pożywki i utworzenie się wgłębień na jej powierzchni. Rozkład mleka przez drobnoustroje objawia się klarowaniem lub rozpuszczeniem początkowo zsiadłego mleka. Obecność aktywności hemolitycznej kultury testowej sprawdza się poprzez zaszczepienie jej na specjalnym agarze z krwią. W wyniku zniszczenia wokół kolonii powstają (na przykład hemolityczne lub) strefy oczyszczające.
2. Podłoża do identyfikacji zdolności drobnoustrojów do rozkładu węglowodanów i wysokoatomowych (pożywka Endo, pożywka Levina, pożywka Russella, pożywka Drigalsky'ego - Conradiego, pożywka Rapoport - Weintrauba, pożywka Shustova). Aby zidentyfikować te właściwości mikroorganizmów, stosuje się również serię „różnorodną”, czyli serię probówek zawierających różne węglowodany, alkohole wielowodorotlenowe i wskaźnik. Jako wskaźniki stosuje się nalewkę lakmusową lub błękit bromotymolowy. Rozkład któregokolwiek z węglowodanów z utworzeniem kwasu wykrywa się poprzez zmianę koloru wskaźnika, powstawanie gazu wykrywa się poprzez napełnienie gazem i pływanie specjalnego szklanego pływaka w ciekłym ośrodku. Lub użyj półpłynnej pożywki Hiss (patrz) z 0,5% agarem z odpowiednimi cukrami i wskaźnikiem Andrade. Po zaszczepieniu drobnoustroju na tych podłożach, tworzenie się kwasu wykrywa się poprzez zaczerwienienie podłoża, a tworzenie się gazu poprzez pojawienie się jego pęcherzyków na agarze lub przez pęknięcie i przesunięcie kolumny agarowej w górę. Do podłoży do diagnostyki różnicowej drugiej grupy zalicza się także agar skrobiowy, który służy do określenia zdolności drobnoustrojów do rozkładania skrobi, pożywkę Clarka itp.
3. Pożywki, na których stwierdza się zdolność drobnoustrojów do odbarwiania barwników dodanych do bulionu: błękit metylenowy, tionina, lakmus, czerwień neutralna lub inne (pożywka Rothbergera, pożywka Omelyansky’ego). Do trzeciej grupy zaliczają się także podłoża zawierające azotany, które służą do określenia zdolności drobnoustrojów do redukcji soli kwasu azotowego (azotanów) do soli kwasu azotawego (azotynów), a następnie do amoniaku lub wolnego azotu.
4. Podłoża ujawniające zdolność drobnoustrojów do przyswajania substancji nieprzyswajalnych przez inne drobnoustroje, np. podłoże z cytrynianem sodu (agar cytrynianowy Simonsa) w celu odróżnienia Escherichia coli, która nie posiada zdolności asymilacji tego podłoża, od innych bakterii grupy jelitowej lub podłoże z kwasem oleinowo-sodowym do różnicowania prątków błonicy od błonicy fałszywej i dyfteroidów (agar Engeringa).
Do podłoży do diagnostyki różnicowej zalicza się także podłoża do różnicowania beztlenowców, podłoża tellurytowe do różnicowania bakterii błonicy, podłoża z mocznikiem, podłoża alkaliczne (agar Dieudonne’a) do hodowli Vibrio cholerae itp. Patrz także Identyfikacja drobnoustrojów.
Pożywki klasyfikuje się ze względu na ich skład i przeznaczenie.
1.Według składu Pożywki dzielą się na proste i złożone
Istnieje grupa środowisk ogólnego przeznaczenia – prostych. Do tej grupy zalicza się bulion mięsno-peptonowy (bulion prosty odżywczy), agar mięsno-peptonowy (agar prosty odżywczy), pożywną żelatynę. Podłoża te służą do hodowli wielu drobnoustrojów chorobotwórczych. Pożywki ogólnego przeznaczenia, czyli proste pożywki, przygotowuje się najczęściej z hydrolizatów z dodatkiem peptonu i chlorku sodu. Wykorzystywane są także jako podstawa do przygotowania skomplikowanych mediów.
Ponadto, zgodnie ze swoim składem, wyróżniają się pożywki białkowe, bezbiałkowe i mineralne. 2. Według pochodzeniaśrodowiska są podzielone na sztuczne i naturalne (naturalne).
Naturalne pożywki mogą zawierać składniki pochodzenia zwierzęcego (np. krew, surowica, żółć) lub roślinnego (np. kawałki warzyw i owoców).
3. Zgodnie z przeznaczeniem przeznaczyć środki konserwujące(do siewu pierwotnego i transportu), środowisko wzbogacające(w celu akumulacji określonej grupy bakterii), Media kulturowe(uniwersalne proste, złożone specjalne i do tworzenia toksyn), podłoża do izolacji i akumulacji (konserwantowe, wzbogacające i selektywne) oraz środowisko identyfikacyjne(różnicowy i elekcyjno-różnicowy).
Konserwujące pożywki hodowlane zapobiegają śmierci patogenów i hamują rozwój saprofitów. Najczęściej stosowane są mieszanina gliceryny, roztwór hipertoniczny, glicerynowy środek konserwujący z LiCl 2, roztwór cytrynianu sodu i dezoksycholanu sodu.
Pożywki wzbogacające dla bakterii
Media wzbogacające(np. pożywka Kitta-Tarozzi, bulion selenitowy, pożywka tioglikolowa) służą do akumulacji określonej grupy bakterii poprzez stworzenie warunków optymalnych dla niektórych gatunków i niekorzystnych dla innych. Najczęściej jako takie środki stosuje się różne barwniki i chemikalia - sole żółciowe, tetrationian Na+, telluryn K, antybiotyki, fuksynę, fiolet goryczki, zieleń brylantową itp.
Media różnicuje się także ze względu na ich przeznaczenie. diagnostyka planowa, specjalna i różnicowa.
Środowiska wybieralne (selektywne, selektywne, akumulacyjne, wzbogacające). Zasada tworzenia selektywnych pożywek opiera się na zaspokojeniu podstawowych potrzeb biochemicznych i energetycznych rodzaju drobnoustroju, dla którego są przeznaczone do hodowli, lub na dodatku inhibitorów hamujących rozwój mikroflory towarzyszącej. Określony skład i stężenie składników odżywczych, mikroelementów, czynników wzrostu przy ściśle określonej wartości pH lub dodatek inhibitorów zapewniają optymalne warunki do hodowli jednego lub kilku rodzajów mikroorganizmów. W przypadku wysiania na nie materiału zawierającego mieszaninę różnych drobnoustrojów, w pierwszej kolejności nastąpi rozwój gatunku, dla którego środowisko będzie selektywne. Przykładami pożywek planowych są bulion żółciowy, bulion selenitowy, pożywka Ploskireva – do hodowli drobnoustrojów z rodziny jelitowej, alkaliczna woda peptonowa – dla Vibrio cholerae.
Rosół z żółcią. Do MPB dodaje się 10-20% żółci wołowej. Żółć hamuje rozwój ziarniaków i flory powietrznej, ale sprzyja rozprzestrzenianiu się salmonelli.
Bulion selenitowy. Składa się z bulionu fosforanowego z dodatkiem soli sodowej seleninu, który jest inhibitorem wzrostu flory kokosowej i Escherichia coli, ale nie hamuje rozwoju salmonelli.
Środa Ploskirewa. Gęste podłoże zawierające inhibitory E. coli, coli, ale korzystne dla wzrostu Shigella i Salmonella, którego reprodukcji nie hamują zielone sole brylantowe i sole żółciowe.
Woda petonowa. Zawiera 1% peptonu i 0,5% chlorku sodu. Środowisko jest selektywne dla Vibrio cholerae, ponieważ rozmnażają się lepiej niż inne bakterie w „głodnych środowiskach”, zwłaszcza przy odczynie zasadowym, ponieważ same wydzielają kwaśne produkty przemiany materii.
Specjalne środowiska. Niezbędny do hodowli bakterii, które nie rosną na prostych pożywkach. W przypadku niektórych organizmów konieczne jest dodanie węglowodanów, krwi i innych dodatkowych składników odżywczych do prostych pożywek. Przykładami prostych pożywek są bulion cukrowy i agar cukrowy dla paciorkowców (przygotowane odpowiednio z MPB i MPA, do których dodaje się 0,5-2% glukozy).
W przypadku pneumokoków i meningokoków specjalnym podłożem jest bulion serwatkowy i agar serwatkowy (w celu przygotowania bulionu serwatkowego 1 część MPB miesza się z 2 częściami świeżej surowicy; w celu uzyskania agaru serwatkowego do roztopionego roztworu dodaje się 10-25% sterylnej surowicy końskiej lub bydlęcej MPA).
Różnicowe środowiska diagnostyczne służy do określenia gatunku badanego drobnoustroju na podstawie charakterystyki jego metabolizmu. Ze względu na przeznaczenie środowiska diagnostyki różnicowej dzieli się na:
1. Nośniki do detekcji zdolność proteolityczna drobnoustroje zawierające mleko, żelatynę, krew itp.
2. Pożywki z węglowodanami i alkoholami wielowodorotlenowymi do
wykrywanie różnych enzymy sacharylityczne.
Do składu pożywek do diagnostyki różnicowej przeznaczonych do identyfikacji właściwości sacharolitycznych i enzymów redoks dodano następujące wskaźniki: czerwień obojętna, fuksyna kwaśna, błękit bromotymolowy, błękit wodny z kwasem rozolowym (BP). Zmieniając swoją barwę przy różnych wartościach pH, wskaźnik sygnalizuje obecność enzymu i rozkład składnika wprowadzonego do pożywki.
Przykłady środowisk diagnostyki różnicowej:
Środowisko Endo. Zawiera MPA z dodatkiem 1% laktozy i zasadową fuksynę (wskaźnik) odbarwioną siarczynem sodu. Medium Endo ma lekko różowy kolor. Stosowany w diagnostyce infekcji jelitowych w celu odróżnienia bakterii rozkładających laktozę do postaci kwaśnych produktów od bakterii, które nie mają tej zdolności. Kolonie drobnoustrojów laktododatnich (Escherichia coli) są czerwone ze względu na redukcję fuksyny. Kolonie mikroorganizmów nie zawierających laktozy - salmonella, shigella itp. - są bezbarwne.
Różnicowe środowiska diagnostyczne obejmują krótkie i rozszerzone pstrokaty rząd. W jego skład wchodzą pożywki z węglowodanami (pożywki Hissa), MPB, mleko oraz żelatyna mięsno-peptonowa.
Syczące media przygotowywane są na bazie wody peptonowej, do której dodaje się chemicznie czyste mono-, di- lub polisacharydy (glukoza, laktoza, skrobia itp.).
Aby wykryć zmiany pH w wyniku tworzenia się kwasów i rozkładu węglowodanów, do pożywki dodaje się wskaźnik. Przy głębszym rozkładzie węglowodanów powstają produkty gazowe (CO 2, CH 4 itp.), które wychwytuje się za pomocą pływaków - małych probówek opuszczanych do góry nogami do pożywki. Pożywki zawierające węglowodany można przygotować także jako pożywki gęste z dodatkiem 0,5-1% agaru-agaru. Następnie wykrywa się powstawanie gazu poprzez tworzenie się pęcherzyków (pęknięć) w kolumnie ośrodka.
Na MPB, który należy do pstrokatej serii, znajdują się produkty powstające podczas rozkładu aminokwasów i peptonów (indol, siarkowodór). Siarkowodór wykrywa się poprzez umieszczenie paska bibuły filtracyjnej nasączonej roztworem octanu ołowiu w MPB po wysianiu kultury. Podczas rozkładu aminokwasów zawierających siarkę uwalnia się siarkowodór, a papier staje się czarny z powodu tworzenia się siarczku ołowiu. Do ustalenia indol możesz użyć złożonego wskaźnika. Indol powstaje w wyniku rozkładu tryptofanu i można go wykryć, dodając ten wskaźnik do kultury hodowanej na MPB. W obecności indolu MPB zmienia kolor na zielony lub niebieski.
W praktycznych laboratoriach bakteriologicznych są one szeroko stosowane metody mikro i ekspresowe do orientacyjnego badania właściwości biochemicznych mikroorganizmów. Istnieje wiele systemów testowych służących do tego celu. Najczęściej stosowany system papierków wskaźnikowych (SIB). SIB to krążki z bibuły filtracyjnej impregnowanej roztworami cukrów lub innych substratów w połączeniu ze wskaźnikami. Takie krążki zanurza się w probówce z kulturą hodowaną w płynnej pożywce. Pracę enzymu ocenia się na podstawie zmiany koloru krążka z podłożem. Systemy mikrotestów do badania identyfikacji enterobakterii reprezentowane są przez jednorazowe plastikowe pojemniki z pożywkami zawierającymi różne substraty z dodatkiem wskaźników. Zasianie czystej kultury mikroorganizmów w takich układach testowych pozwala szybko zidentyfikować zdolność bakterii do wykorzystania cytrynianów, glukozy, sacharozy, uwolnienia amoniaku, indolu, rozkładu mocznika, lizyny, fenyloalaniny itp.
Agar odżywczy, podobnie jak główne podłoża do diagnostyki różnicowej, produkowany jest obecnie w postaci suchych preparatów zawierających wszystkie niezbędne składniki. Do takich proszków wystarczy dodać wodę i zagotować, a następnie po zsypaniu poddać sterylizacji.
